色譜常見(jiàn)問(wèn)題問(wèn)答

色譜常見(jiàn)問(wèn)題問(wèn)答

問(wèn)：用HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移，有時(shí)發(fā)生快速變化，原因何在?如何解決?
答：關(guān)于漂移問(wèn)題：?
1、溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定
2、流動(dòng)相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應等
3、柱子未平衡好，需對柱子進(jìn)行更長(cháng)時(shí)間的平衡
關(guān)于快速變化問(wèn)題?
1、流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設定流速，使之保持穩定
2、泵中有氣泡，可通過(guò)排氣等操作將氣泡趕出。
3、流動(dòng)相不合適，解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內進(jìn)行適當混合

問(wèn)：色質(zhì)聯(lián)用中毛細柱的選擇應注意什么問(wèn)題?
答：1、柱效要高
2、熱穩定性好
3、化學(xué)惰性強
具體選擇應注意：
?1、柱極性。根據分析樣品選擇不同極性的柱子進(jìn)行分析
2、柱子內徑。內徑大小決定柱容量
3、液膜厚度。分析樣品溫度一不一樣，對膜厚有不同要求，溫度高液膜要厚，溫度低液膜要薄
4、柱長(cháng)度。柱越長(cháng)，柱效越高，分離效果越好，但也存在吸附問(wèn)題，柱子過(guò)長(cháng)，分析時(shí)間長(cháng)，因此要根據樣品考慮柱子長(cháng)度
5、外涂層(柱體)的選擇
6、另外還有儀器型號、分析對象等因素

問(wèn)：液相色譜中峰出現拖尾或出現雙峰的原因是什么?
答：1、篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。
2、存在干擾峰，解決辦法為使用較長(cháng)的柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子

問(wèn)：從那些方面可以簡(jiǎn)單判別毛細管柱子的熱穩定性好壞?
答：1、分配容量(或容量因子)K，好的柱子在高溫運行后，分配容量K不應有明顯的下降，否則，說(shuō)明柱子的熱穩定性不好。
2、理論塔板數n，熱穩定性好的柱子經(jīng)受高溫后，理論塔板數應基本保持恒定
3、柱子的極性。熱穩定性好的柱子，高溫前后極性變化不大，具體表現為保留指數I值沒(méi)有大的變化。
4、噪聲。熱穩定性好的柱子在高溫下使用后，噪聲不能增加.
5、柱子的去活層，毛細管柱子涂固定液前內部一般要用去活性試劑去活以增加惰性。質(zhì)量好的毛細管柱子高溫后，去活層不應該變化，表現在對強極性樣品或酸堿性樣品的吸附性不能增加。

問(wèn)：為什么進(jìn)樣器內的玻璃襯套會(huì )對色譜行為造成影響?
答：進(jìn)樣器內的玻璃襯套主要有下列作用：
?1、提供一個(gè)溫度均勻的汽化室，防止局部過(guò)熱。
2、玻璃的惰性不如不銹鋼好，減少了在汽化期間樣品分解的可能性。
3、易于拆換清洗 ，以保持清潔的汽化室表面，一些痕量非揮發(fā)性組分會(huì )逐漸積累殘存于汽化室，高溫下會(huì )慢慢分解，使基流增加，噪聲增大，通過(guò)清洗玻璃襯套可以消除這種影響。
4、可根據需要選擇管壁厚度及內徑適宜的玻璃襯套，以改變汽化室的體積，而不用更換整個(gè)進(jìn)樣加熱塊。從以上幾個(gè)方面可以知道玻璃襯套對色譜行為造成影響的原因。

問(wèn)：毛細管色譜分流進(jìn)樣時(shí)，非線(xiàn)性分流的主要原因是什么?
答：1、進(jìn)樣器溫度太低，樣品汽化不完全，發(fā)生分級分流。
2、進(jìn)樣器溫度太高，某些組分可能發(fā)生熱分解，也有的樣品可能發(fā)生催化分解，或樣品部分地被吸附在進(jìn)樣器內表面上。
3、在分流點(diǎn)以前樣品沒(méi)有混合均勻或混合不充分。
4、系統的進(jìn)樣墊，柱接頭等地方漏氣。

問(wèn)：HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法
答：1、樣品量不足：解決辦法為增加樣品量
2、樣品未從柱子中流出：可根據樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子
3、樣品與檢測器不匹配：根據樣品化學(xué)性質(zhì)調整波長(cháng)或改換檢測器
4、檢測器衰減太多：調整衰減即可。
5、檢測器時(shí)間常數太大：解決辦法為降低時(shí)間參數
6、檢測器池窗污染：解決辦法為清洗池窗。
7、檢測池中有氣泡：解決辦法為排氣。
8、記錄儀測壓范圍不當：調整電壓范圍即可。
9、流動(dòng)相流量不合適：調整流速即可。
10、檢測器與記錄儀超出校正曲線(xiàn)：解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線(xiàn)。

問(wèn)：做HPLC分析時(shí)，柱壓不穩定，原因何在?如何解決?
答：原因可能有：?
1、泵內有空氣，解決的辦法是清除泵內空氣，對溶劑進(jìn)行脫氣處理；
2、比例閥失效，更換比例閥即可。
3、泵密封墊損壞，更換密封墊即可。
4、溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時(shí)改變脫氣方法；
5、系統檢漏，找出漏點(diǎn)，密封即可。
6、梯度洗脫，這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的。

問(wèn)：做PGS／MS分析時(shí)，如何防止焦油狀污染物進(jìn)入毛細柱?
答：聚合物，尤其是一些含氮、硫及鹵素的高分子裂解時(shí)，常有焦油狀物質(zhì)產(chǎn)生。為防止這種焦油狀物質(zhì)進(jìn)入毛細柱造成污染而使柱性能下降，可采用保護預柱，即在裂解器與毛細柱之間接一填充預柱，通過(guò)控制預柱溫度而使焦油狀物質(zhì)滯留在預柱內，預注可置于GC氣化室內，這樣既容易控制溫度，又減少系統的死體積，當然，預柱填料需經(jīng)常更換。

問(wèn)：我最近更換了另一種牌號的ODS柱，雖然分離情況仍可以，但保留時(shí)間不能重現，為什么?
答：這是因為被分析物可能具有形成氫健的能力。盡管過(guò)去幾年來(lái)，填料的制造技術(shù)有了極大的提高，但不同的廠(chǎng)商的ODS填料表面硅醇基的濃度不同。正是這些硅醇基可能與樣品發(fā)生相互作用。因此，同一被分析物中的各組分在不同牌號的ODS柱上的相對保留時(shí)間就可能不同。在流動(dòng)相中加入少量競爭物，如三乙基胺(TEA)，將會(huì )使硅醇基的成鍵能力飽和，從而保證不同牌號柱子上的相對保留時(shí)間具有較好的重現性。

問(wèn)：我購買(mǎi)的HPLC柱驗收測試時(shí)柱壓過(guò)高，請問(wèn)為什么?
答：柱壓過(guò)高是HPLC柱用戶(hù)最常碰到的問(wèn)題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問(wèn)題，您可按下面步驟檢