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熒光顯微鏡檢測原理及方法
作者：
時(shí)間：2013-03-05
來(lái)源：網(wǎng)絡(luò )
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熒光顯微鏡檢測方法
一、熒光顯微鏡
熒光顯微鏡是免疫熒光細胞化學(xué)的基本工具。它是由光源、濾板系統和光學(xué)系統等主要部件組成。是利用一定波長(cháng)的光激發(fā)標本發(fā)射熒光，通過(guò)物鏡和目鏡系統放大以觀(guān)察標本的熒光圖像（圖1）。
（一）光源
現在多采用200W的超高壓汞燈作光源，它是用石英玻璃制作，中間呈球形，內充一定數量的汞，工作時(shí)由兩個(gè)電極間放電，引起水銀蒸發(fā)，球內氣壓迅速升高，當水銀完全蒸發(fā)時(shí)，可達50～70個(gè)標準大氣壓力，這一過(guò)程一般約需5～15min。超高壓汞燈的發(fā)光是電極間放電使水銀分子不斷解離和還原過(guò)程中發(fā)射光量子的結果。它發(fā)射很強的紫外和藍紫光，足以激發(fā)各類(lèi)熒光物質(zhì)，因此，為熒光顯微鏡普遍采用。 
圖1 熒光顯微鏡的結構和主要部件
超高壓汞燈也散發(fā)大量熱能。因此，燈室必須有良好的散熱條件，工作環(huán)境溫度不宜太高。
新型超高壓汞燈在使用初期不需高電壓即可引燃，使用一些時(shí)間后，則需要高壓?jiǎn)?dòng)（約為15000V），啟動(dòng)后，維持工作電壓一般為50～60V，工作電流約4A左右。200W超高壓汞燈的平均壽命，在每次使用2h的情況下約為200h，開(kāi)動(dòng)一次工作時(shí)間愈短，則壽命愈短，如開(kāi)一次只工作20min，則壽命降低50%。因此，使用時(shí)盡量減少啟動(dòng)次數。燈泡在使用過(guò)程中，其光效是逐漸降低的。燈熄滅后要等待冷卻才能重新啟動(dòng)。點(diǎn)燃燈泡后不可立即關(guān)閉，以免水銀蒸發(fā)不完全而損壞電極，一般需要等15min。由于超高壓汞燈壓力很高，紫外線(xiàn)強烈，因此燈泡必須置燈室中方可點(diǎn)燃，以免傷害眼睛和發(fā)生爆炸時(shí)造成操作。
超高壓汞燈（100W或200W）光源的電路和包括變壓、鎮流、啟動(dòng)幾個(gè)部分。在燈室上有調節燈泡發(fā)光中心的系統，燈泡球部后面安裝有鍍鋁的凹面反射鏡，前面安裝有集光透鏡。
國產(chǎn)超高壓汞燈GCQ-200型性能良好，可以代替HBO-200等型的進(jìn)口燈泡，平均壽命在200h以上，價(jià)格也比較低。
我國研制的一種簡(jiǎn)易輕便型高色溫溴鎢熒光光源裝置，體積小，重量輕，功率小，交、直流兩用（自帶直流電源），易于攜帶，使用方便，已推廣應用。
（二）濾色系統
濾色系統是熒光顯微鏡的重要部位，由激發(fā)濾板和壓制濾板組成。濾板型號，各廠(chǎng)家名稱(chēng)常不統一。濾板一般都以基本色調命名，前面字母代表色調，后面字母代表玻璃，數字代表型號特點(diǎn)。如德國產(chǎn)品（Schott）BG12，就是種藍色玻璃，B是藍色的第一個(gè)字母，G是玻璃的第一個(gè)字母；我國產(chǎn)品的名稱(chēng)已統一用拼音字母表示，如相當于BG12的藍色濾板名為QB24，Q是青色（藍色）拼音的第一個(gè)字母，B是玻璃拼音的第一個(gè)字母。不過(guò)有的濾板也可以透光分界濾長(cháng)命名，如K530，就是表示壓制濾長(cháng)530nm以下的光而透過(guò)530nm以上的光。還有的廠(chǎng)家的濾板完全以數字命名，如美國Corning廠(chǎng)的NO：5-58，即相當于BG12。
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