利用RRLC改善西洋參HPLC的分離速度和靈敏度

圖4 西洋參分析中RRLC梯度分離的重現性，色譜條件同圖3RRLC和HPLC的轉換

RRLC的良好兼容型與靈活性，使用戶(hù)可以根據需要在同一儀器硬件上靈活使用常規HPLC色譜柱和RRLC色譜柱。而鍵合相品牌豐富的ZORBAX RRHT色譜柱（如SB、XDB、Extend、Eclipse Plus等），又為相同品牌、不同粒徑填料之間方法的相互轉換提供了便利條件，使RRLC與HPLC之間方法的相互轉換非常方便?；诂F有RRLC分離條件，也可以非常容易地獲得相應HPLC的分離方法。只需用Method Translator將參數進(jìn)行直接轉換，即可獲得根據RRLC方法優(yōu)化參數相應的HPLC條件參數。本研究使用相同的RRLC系統和HPLC色譜柱，獲得了分離選擇性與RRLC幾乎完全相同的HPLC分離結果（見(jiàn)圖5）。

圖5 西洋參分析中HPLC與RRLC分離色譜圖比較值得注意的是：與RRLC相比，HPLC在相同進(jìn)樣量時(shí)獲得的色譜峰高較低，故相對靈敏度較低。同時(shí)，分離時(shí)間也大大加長(cháng)，溶劑消耗亦相應提高。

討論與結論

－中國藥典的藥物分析方法中并未指定色譜柱品牌。而不同品牌、相同鍵合相的色譜柱又存在不同的選擇性差異，故直接應用藥典方法時(shí)往往需要對方法進(jìn)行調整或優(yōu)化，尤其是對于復雜樣品的分離而言。使用小顆粒短柱的RRLC分離可以顯著(zhù)加快分離速度，故可以大大縮短方法開(kāi)發(fā)和優(yōu)化過(guò)程所需的時(shí)間。如此獲得的RRLC分離條件，又可以簡(jiǎn)單方便地轉換成常規HPLC方法，并在RRLC系統上實(shí)現HPLC分離。所以，使用RRLC系統進(jìn)行分離會(huì )大大提高工作效率。

－RRLC分離不僅可以大幅度縮短分析時(shí)間，而且能夠降低溶劑消耗。

－RRHT色譜柱擁有與常規HPLC內徑相同的4.6mm色譜柱，使之可以接近或保持與HPLC相同的進(jìn)樣量。與HPLC相比，在保持相同進(jìn)樣量的前提下，使用小顆粒填料的RRLC可以顯著(zhù)改善分離靈敏度。

－RRLC可以在快速分析中仍然保持出色的分離重現性。

－不同色譜柱具有不同的選擇性，因而可以造成方法轉換中的分離狀況變化。選擇具有相同鍵合相品牌的不同顆粒色譜柱，會(huì )簡(jiǎn)化HPLC與RRLC方法之間相互轉換中的參數優(yōu)化過(guò)程。ZORBAX系列RRHT色譜柱涵蓋了非常豐富的鍵合相品牌，如SB、XDB、Eclipse Plus、Extend等，方便用戶(hù)靈活選擇與HPLC相同品牌鍵合相的小顆粒填料。

－溫度對色譜柱選擇性的調節作用不可小視。RRLC具有制冷功能的柱溫箱，不僅溫度控制范圍寬（室溫以下15～100℃），而且控溫精確高（±0.05℃），即便在室溫以下亦能精密控溫?？焖?、精確的溫度調節與控制能力，不僅保證了分離的保留時(shí)間重現性，而且為用戶(hù)利用溫度進(jìn)行選擇性調節提供了極大的便利。

色譜條件
色譜柱：ZORBAX SB C18 4.6×150mm，5
流動(dòng)相：A為0.1%H3PO4，B為乙腈，梯度分離
流速：1ml/min
其它條件同圖2。(end)