高效液相色譜儀操作三要點(diǎn)

　　2、被測樣品

　　液相系統中的第二個(gè)顆粒物來(lái)源是被測樣品。一些實(shí)驗室在將他們的樣品放置在自動(dòng)進(jìn)樣器盤(pán)（或手動(dòng)進(jìn)樣）以前，所有樣品都先通過(guò)一個(gè)0.45 μm針筒式過(guò)濾器過(guò)濾。這是一個(gè)有效除去被測樣品中顆粒物的方法。但是這個(gè)過(guò)程也有一點(diǎn)需要關(guān)注：你使用了針筒式過(guò)濾器就不可能100%得到通過(guò)過(guò)濾器的被測樣品，總會(huì )有或多或少的丟失。丟失來(lái)自這樣幾方面：過(guò)濾器濾膜的吸附、過(guò)濾器濾出的顆粒物上的吸附、針筒式濾膜過(guò)濾器與針筒連接處的滲漏等。如果有丟失，過(guò)濾后液體中被測物的含量或濃度與原基本樣液的含量或濃度還相同嗎？這個(gè)問(wèn)題一般需要通過(guò)實(shí)驗確認。確認這步是要增加工作量和費用的。過(guò)濾器的使用是一種消耗，每個(gè)過(guò)濾器的價(jià)格從幾元到十幾元。但在做食品中殘留物分析時(shí)，由于基質(zhì)大多比較復雜，所以過(guò)濾這步已成為不可或缺的一步。在實(shí)際分析工作中，一般檢測每一組樣品會(huì )帶一個(gè)外標、一個(gè)添加回收或是質(zhì)控樣品，所以，只要最終檢測時(shí)得到的信噪比能滿(mǎn)足檢出限要求，可將這步視為系統誤差而忽略。

　　3、儀器系統部件的磨損物

　　最后，在HPLC系統中顆粒物的另一個(gè)主要來(lái)源是輸液泵密封墊和進(jìn)樣閥旋轉軸的磨損。關(guān)于輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議。

　　第一種建議認為，在一般實(shí)驗室中輸液泵密封墊通常使用壽命為六個(gè)月到一年，因此建議半年或一年更換這些密封墊，實(shí)驗室應基于上述觀(guān)點(diǎn)制定定期預防性維護計劃。該觀(guān)點(diǎn)認為：與輸液泵密封墊顆粒堵塞柱子而更換新柱子的費用相比，更換密封墊的費用低些。一些輸液泵有玻璃砂芯或篩網(wǎng)，可在流路中濾掉從泵密封墊磨損下來(lái)的顆粒物，防止這些顆粒物隨流動(dòng)相流至柱頭。若有這種裝置應查閱輸液泵操作手冊，查看推薦的這種過(guò)濾器清洗或更換的間隔。

　　另一種建議則認為，原裝密封墊的密封效果最好，更換以后容易引起流動(dòng)相滲漏。所以，只要不漏液就不要輕易更換密封墊。

　　兩種說(shuō)法都有其道理，具體如何操作，建議與儀器公司工程師溝通，各公司的儀器還是有些不同的。

　　自動(dòng)進(jìn)樣器旋轉軸的密封隨著(zhù)使用時(shí)間也會(huì )磨損，但是在我的經(jīng)驗中，即便是高負荷的運轉旋轉軸密封墊也可以使用幾年。如果你的自動(dòng)進(jìn)樣器系統有計數進(jìn)樣閥轉動(dòng)次數的功能，你可以設定一個(gè)警鈴當預設閥轉動(dòng)次數已達到時(shí)提醒你。曾有一種說(shuō)法，進(jìn)樣器最多轉動(dòng)20，000次，這僅僅是進(jìn)樣10000個(gè)；但這似乎不是實(shí)驗室涉及的常規樣品分析使用壽命，它們的實(shí)際使用壽命會(huì )更長(cháng)。旋轉軸密封磨損后會(huì )滲液，比較明顯的特征是同一樣品多次進(jìn)樣后，峰面積值差別比較大（RSD》5%）。當然，輸液泵的密封墊和旋轉軸的密封墊磨損將增加更多研磨物在流動(dòng)相中，加速對這些部件的損傷。此外，如果你日常運行的流動(dòng)相有緩沖鹽，如磷酸緩沖鹽，密封墊的磨損會(huì )更快。

　　無(wú)論顆粒物源于何物，實(shí)驗時(shí)都要將其除去。推薦在HPLC系統中采用一個(gè)0.45或0.5 μm的在線(xiàn)多孔過(guò)濾器，接在自動(dòng)進(jìn)樣器和柱子之間，即使已使用了保護柱。這個(gè)在線(xiàn)過(guò)濾器將成為擋板代替柱頭的濾板，而且如采用一個(gè)玻璃砂芯濾板，既便宜，更換又方便（幾分鐘就可更換）。若采用在線(xiàn)過(guò)濾，HPLC系統檢測每批樣品開(kāi)始前記錄下壓力值，當壓力上升一定值，例如25%或增加500psi，應該更換玻璃砂芯濾板了，更換以后沖洗幾分鐘系統將恢復到原來(lái)的壓力值。

　　三、沖洗

　　使HPLC系統良好運行的第三個(gè)要點(diǎn)是保持系統的清潔。你需要關(guān)注流動(dòng)相流經(jīng)該系統的所有地方，對于這些地方經(jīng)常性的沖洗，將使你的系統保持在“Ready”狀態(tài)。

　　1、流動(dòng)相儲液瓶

　　首先要經(jīng)常清洗流動(dòng)相儲液瓶，或者每做一批新樣品更換一次流動(dòng)相。一個(gè)臟的儲液瓶將會(huì )污染注入的流動(dòng)相。建議儲液瓶中緩沖液使用時(shí)間不要超過(guò)一周，而有機溶劑使用時(shí)間不要超過(guò)一個(gè)月。也有人建議儲液瓶中保持用溶劑充滿(mǎn)，直到更換分析方法儲液瓶需更換新溶劑（流動(dòng)相組成發(fā)生變化）時(shí)，將舊溶劑倒掉更換新溶劑，這樣勝于將溶劑用完。但這對于分析樣品量少的實(shí)驗室而言似乎有些浪費。儀器公司的工程師建議儲水瓶的水要天天換，每周瓶子還應該用異丙醇清洗一次。有的實(shí)驗室則在水里加入0.1～1 mM的甲酸抑制微生物的生長(cháng)。這些做法看起來(lái)有些繁瑣，但卻能起到“磨刀不誤砍柴工”作用。

　　2、泵

　　接下來(lái)要沖洗的是泵。千萬(wàn)不要一分析完沖幾分鐘后就停泵，特別是當流動(dòng)相中含有難揮發(fā)的緩沖液（如磷酸鹽）時(shí)。如果儀器不是連續使用，當流動(dòng)相蒸發(fā)時(shí)，難揮發(fā)物就會(huì )粘在活塞密封墊的表面，難揮發(fā)物將形成固形物沉淀。這是泵密封墊磨損和單向閥滲漏的主要原因之一。所以，無(wú)論使用長(cháng)短，在停泵以前一定要用非緩沖液流動(dòng)相沖洗泵在半個(gè)小時(shí)以上，要是流動(dòng)相中有難揮發(fā)緩沖鹽則建議沖洗的時(shí)間應該更長(cháng)些。

　　3、自動(dòng)進(jìn)樣器

　　自動(dòng)進(jìn)樣器也要按規定清洗?，F在的儀器多配有自動(dòng)進(jìn)樣器的沖洗液瓶，通常只要注意及時(shí)更換、補充沖洗液即可。自動(dòng)進(jìn)樣器用的洗滌液也要采用與流動(dòng)相相同的方式處理，并根據溶劑的有效期和規定，清洗儲液瓶或更換洗滌液?，F在的自動(dòng)進(jìn)樣器設置、操作都很簡(jiǎn)單，如果時(shí)間允許（特別是利用夜間運行），每次分析完后設置進(jìn)1、2針純溶劑（如甲醇、乙腈），也是一個(gè)好做法。

　　4、色譜柱

　　對柱子的污染是隨使用時(shí)間而增加。通常表現是：運行走基線(xiàn)時(shí)在記錄的色譜圖中基線(xiàn)噪音增加，泵壓也增加。解決這個(gè)問(wèn)題的最有效方法就是在每一批樣品分析結束后或準備卸下柱子時(shí)用大量的流動(dòng)相沖洗柱子（例如，甲醇、乙腈和水）。用梯度沖洗效果更好，具體的比例要根據柱子的說(shuō)明書(shū)和性質(zhì)而定。

　　5、檢測器

　　如果是正常使用，檢測器將依據其性質(zhì)并按照說(shuō)明書(shū)規定進(jìn)行洗。例如UV/VIS檢測器或FL檢測器，在對柱子和系統進(jìn)行沖洗時(shí)也就一同對檢測器流通池中污染物進(jìn)行了清洗。但是蒸發(fā)光檢測器或質(zhì)譜儀則需要按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行定期清洗。這些檢測器在使用時(shí)會(huì )有難揮發(fā)污染物沉積，如質(zhì)譜儀離子源的噴針、毛細管、錐孔板、預四極等部件，因而需要定期清洗。而且對聯(lián)有這些檢測器的系統沖洗時(shí)，最好與這些檢測器斷開(kāi)，以減少對檢測器的污染。

　　總之，實(shí)驗室日常使用的液相色譜儀要是能認真做好這三項工作——脫氣、過(guò)濾和沖洗，你的儀器可以得到良好的預防性維護，使用時(shí)就會(huì )感到比較順手。當然，在實(shí)際操作時(shí)遇到的問(wèn)題并沒(méi)有這么簡(jiǎn)單，但這三個(gè)良好習慣將是正確操作、使用HPLC系統的基礎。