定量分析中怎樣選擇內標法或外標法

定量分析中怎樣選擇內標法或外標法
選一與欲測組分相近但能完全分離的組分做內標物（當然是樣品中沒(méi)有的組分），然后配制欲測組分和內標物的混合標準溶液，進(jìn)樣得相對校正因子。再將內標物加入欲測組分的樣品中，進(jìn)樣后測得欲測組分和內標物的定量參數。用內標法公式計算即可。
內標法是將一定量的純物質(zhì)作內標物，加入到準確稱(chēng)量的試樣中，根據被測試樣和內標物的質(zhì)量比及其相應的色譜峰面積之比，來(lái)計算被測組分的含量。 選擇內標物有4個(gè)要求：1.內標物應是該試樣中不存在的純物質(zhì)；2.它必須完全溶于試樣中，并與試樣中各組分的色譜峰能完全分離；3.加入內標物的量應接近于被測組分；4.色譜峰的位置應與被測組分的色譜峰的位置相近，或在幾個(gè)被測組分色譜峰中間。 內標法的優(yōu)點(diǎn)是測定的結果較為準確，由于通過(guò)測量?jì)葮宋锛氨粶y組分的峰面積的相對值來(lái)進(jìn)行計算的，因而在一定程度上消除了操作條件等的變化所引起的誤差。內標法的缺點(diǎn)是操作程序較為麻煩，每次分析時(shí)內標物和試樣都要準確稱(chēng)量，有時(shí)尋找合適的內標物也有困難。 外標法簡(jiǎn)便，但進(jìn)樣量要求十分準確，要嚴格控制在與標準物相同的操作條件下進(jìn)行，否則造成分析誤差，得不到準確的測量結果。
內標與外標都是定量的一種方法而已，至于哪一種方法好與不好不能一概而論，做不同的分析，面對著(zhù)不同的要求，再加上分析成本分析效率等等問(wèn)題，我想簡(jiǎn)單而有效進(jìn)行定量分析來(lái)滿(mǎn)足要求才是最重要的
1、以前做過(guò)很多醫藥、農藥中間體的芳香族鹵代化合物的常量定量分析，沒(méi)有自動(dòng)進(jìn)樣器，用外標法定量，確實(shí)重現性與穩定性非常差，結果經(jīng)常受到搞合成同事的質(zhì)疑。其實(shí)，仔細分析原因不一定就是外標法不適合這種定量分析，首先我們的實(shí)驗室儀器和手段是否調整到一種穩定而合理的狀態(tài)了，比如，襯管是否潔凈，玻璃棉的位置是否合適恰當（能否使樣品盡可能的汽化）、汽化溫度是否合適、色譜峰形是否對稱(chēng)（也就是樣品與色譜柱健合相是否匹配）、附近有沒(méi)有其它色譜峰的干擾、選用什么進(jìn)樣方式（如快速進(jìn)樣還是熱針進(jìn)樣）等等因素的影響都需要考慮，如果這些因素都考慮了，按照GMP方法驗證對于精密度的要求，同一樣品進(jìn)6針以上的RSD和配制6個(gè)樣品的定量結果RSD都能滿(mǎn)足小于1.5%的要求，那么這個(gè)方法用外標法就是完全適用的，但是前面的影響因素是一定要都考慮到的，否則談?wù)撨@個(gè)方法是否適用就有失偏頗了。在做過(guò)的許多出口產(chǎn)品的定量分析方法當中有許多是一些醫藥公司提供的比較完善而驗證過(guò)的方法，內標與外標都有（他們用的都是自動(dòng)進(jìn)樣）精密度都能滿(mǎn)足RSD小于1.5%的要求，當一個(gè)方法能夠滿(mǎn)足測試要求的時(shí)候，無(wú)論內標外標，都是可行的，當然有一個(gè)分析成本和分析時(shí)間的問(wèn)題，內標的成本和控制溶液、樣品溶液的配制當然要比外標要高和麻煩一些了。而有些時(shí)候，可能受你實(shí)驗室現有儀器和附屬設備的影響，達不到一定的要求，而還必須進(jìn)行定量分析，有時(shí)外標的結果可能就要差一些，這時(shí)，你可能就要考慮用內標法了，可以排除手動(dòng)進(jìn)樣的誤差、分流歧視的影響、包括一些未知因素平行誤差的影響，這時(shí)內標可能就顯示出它的優(yōu)勢來(lái)了。
2、上面已經(jīng)提到當做方法驗證的時(shí)候，當同一樣品配制6個(gè)樣品溶液用所選用的外標法進(jìn)行定量的時(shí)候，RSD都滿(mǎn)足1.5%的要求時(shí)，也分為兩種情況，小于1%和大于1%小于1.5%。如果RSD的結果小于1%，那這個(gè)方法就沒(méi)有什么可以懷疑的了；如果RSD的結果大于1%而在1.5%略低一些的范圍活動(dòng)時(shí)，這個(gè)方法的可行性就將受到質(zhì)疑，畢竟這是方法驗證，你就要考慮上面1所提到的影響因素的影響了，如果排除掉以上的影響因素，RSD還是在1.5%附近，就要嘗試內標了，如果內標結果的RSD很好，就證明你的這個(gè)方法受實(shí)驗條件的影響很大，只能用內標了，或者干脆將原方法做大的變動(dòng)，再?lài)L試用外標法測試。
3、而對于微量分析，比如農藥和獸藥殘留的分析、環(huán)境分析等，根據不同的限量標準要求對于精密度的要求也比常量分析的要求要寬松的多，RSD有時(shí)可以允許達到10%甚至更高，這時(shí)可能外標法有更大的應用空間
4、單從精密度方面去考慮，排除其它成本和效率的因素，個(gè)人認為還是內標優(yōu)于外標。曾經(jīng)做過(guò)一個(gè)中間體二氨基丙醇的常量定量分析，以二乙醇胺為內標，RTX-5 amine（堿改性） 15m*0.32mm*1.0um色譜柱分析，將配制好的控制溶液（含有內標物）自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)6針，目的物（二氨基丙醇）與內標物（二乙醇胺）峰面積比率的RSD為0.18%，而只對這六針樣品的目的物峰（二氨基丙醇）面積求RSD，結果為0.71%，通過(guò)這一實(shí)例的結果大家就會(huì )發(fā)現到底哪個(gè)方法精密度更好了，當然是內標更好了。當然這個(gè)化合物的檢測方法最后根據上面的驗證數據用內標和外標定量都是可以的，實(shí)驗室可以自由選擇。但內標與外標精密度結果的差異是顯然存在的事實(shí)。
結論：應用外標法能夠滿(mǎn)足要求，首選還是外標法了，畢竟簡(jiǎn)單而省事。對于精密度要求比較高、結果準確度會(huì )產(chǎn)生重大影響、實(shí)驗室條件不是很理想的等等條件下，用內標法還是必要的。無(wú)論應用那種方法，方法的驗證和確認都是很重要的，只要是按照程序經(jīng)過(guò)驗證和確認的方法，都有其應用的空間的。